Application of various methods for studying the secretion of the bovine mammary gland in the diagnosis of mastitis

Full Text

Введение

Мастит — воспалительная реакция тканей молочной железы у коров в ответ на механические, химические и биологические воздействия, которые обычно проявляются в сочетании с предрасполагающими к заболеванию факторами, например наличием у животных анатомических и функциональных аномалий молочной железы, наследственной предрасположенностью к маститу, нарушением иммунного статуса, наличием воспалительных заболеваний репродуктивных органов и др. [1–4]. Независимо от первопричины, вызывающей воспалительный процесс в молочной железе коров, мастит всегда протекает при активном участии микрофлоры [5, 6], проникновение которой чаще всего происходит лактогенным путем. Токсины, выделяемые микроорганизмами, повреждают железистую ткань и протоки молочной железы. Молоко от коров, страдающих маститом, может представлять опасность для здоровья человека и молодняка крупного рогатого скота за счет наличия токсинов, повышенного содержания соматических клеток (СК) и бактериальной обсемененности, а также присутствия остатков антимикробных препаратов, используемых в терапии мастита [7]. В связи с этим более точная и ранняя диагностика мастита является актуальным мероприятием в ветеринарной практике. Наибольшую проблему для молочного животноводства составляет субклинический мастит, при котором регистрируют скрыто протекающее воспаление без проявления клинических признаков, однако происходит разрушение эпителиальных клеток альвеол вымени, непосредственно участвующих в образовании молока. За счет рецепторов лактоциты высвобождают из кровеносных сосудов, окружающих альвеолу, питательные вещества и превращают их в молочный белок, лактозу и жир, в результате при воспалительном процессе в молочной железе наблюдается не только снижение продуктивности, но и снижение качества получаемого молока. Секрет молочной железы (СМЖ) коров — ценный биологический материал для применения различных диагностических методов [8, 9]. В диагностике мастита наряду с традиционными исследованиями СМЖ, включающими подсчет СК и культивирование микроорганизмов, все чаще используются дополнительные методы, позволяющие определить мочевину, лактоферрин, белки острой фазы, в частности амилоид А в молоке коров [10–15]. Определение вышеперечисленных показателей в секрете вымени дает возможность на более ранних стадиях заподозрить наличие воспаления в молочной железе, что позволяет установить более тщательный контроль за данными животными, усилить профилактические и лечебные мероприятия, направленные на предотвращение мастита, тем самым минимизировать экономический ущерб.

Цель исследования — провести комплексное исследование СМЖ коров с применением экспресс и лабораторных методов и установить их роль в диагностике мастита. Поставлены следующие задачи: провести клиническую и экспресс-­диагностику форм мастита; определить такие показатели СМЖ, как СК, мочевина, лактоферрин; провести исследования разными методами с целью определения наличия или отсутствия в пробах СМЖ микроорганизмов, способных вызывать мастит; определить гены резистентности к гликопептидам, цефалоспоринам, карбопенемам, β-лактамам; установить наличие или отсутствие остаточных количеств антибиотиков β-лактамной и тетрациклиновой групп.

Материалы и методы исследования

Работу проводили в течение 2023 г. в отделе репродуктивной биологии и неонатологии и лаборатории микробиологических и молекулярно-­генетических методов исследования Уральского НИВИ — структурного подразделения ФГБНУ УрФАНИЦ УрО РАН.

Объект исследования — лактирующие коровы, СМЖ коров.

Схема эксперимента. Мастит диагностировали в соответствии с Наставлением по диагностике терапии и профилактике мастита у коров ^[1]. Клиническую форму мастита устанавливали с помощью клинического обследования молочной железы. Для диагностики субклинической формы мастита использовали экспресс-тест «Кенотест» (CID LINES, Бельгия). Всего на мастит исследовали 60 животных, содержащихся в сельскохозяйственной организации Свердловской области. Исследования проводили двухкратно с интервалом в 7 дней. Также от коров во время утреннего доения отбирали СМЖ. Отбор проб СМЖ осуществляли в одноразовых перчатках, непосредственно перед взятием молока соски вымени коровы и руки протирали ватным тампоном, смоченным 76 % этиловым спиртом. Сбор образцов начинали с ближних сосков молочной железы. Первые струйки СМЖ сдаивали в контрольную кружку. Затем надаивали 20…30 мл альвеолярного молока в заранее промаркированные контейнеры, при этом отслеживали, чтобы сосок не касался стенок контейнера. Отобранный материал помещали в термос со льдом и в течение 2–3 ч доставляли в лабораторию для микробиологических и ПЦР-исследований, определения количества СК, лактоферрина. Определение мочевины в СМЖ проводили во время доения коров параллельно с отбором проб для лабораторных исследований, для этого во второй контейнер отбирали около 10…15 мл молока и полностью погружали тест-полоску с нанесенным реагентом на 90 секунд до окрашивания, затем вынимали полоску и удаляли избыток молока бумажной салфеткой. После этого сравнивали цвет полоски с цветовой шкалой. Результаты фиксировали на бумажный носитель. По окончанию доения животных отбирали пробу сборного молока для исследования на наличие остаточных веществ.

Оборудование и технические средства. Количество СК определяли на анализаторе молока вискозометрического «Соматос-­Мини» (Костип, Россия) с добавлением расходного материала препарата Мастоприм (Сибагроприбор, Россия).

Концентрацию лактоферрина определяли с помощью набора ИФА Elisa kit for the quantitative determination of Bovine lactoferrin (Bio-­X Diagnostics, Бельгия).

Для экспресс-­диагностики уровня мочевины в молоке использовали тест-полоски (Vet-­MUN; Teco Diagnostics, США).

Наличие остаточных веществ в СМЖ устанавливали с помощью экспресс-­теста Delvotest BLF для определения остаточных количеств антибиотиков β-лактамной группы (пенициллины, цефалоспорины) (DSM Food Specialties, Нидерланды) и Delvotest SP-NT для определения β-лактамной и тетрациклиновой группы (DSM Food Specialties, Нидерланды).

Бактериологическое и микологическое исследование СМЖ: из проб делали посевы на жидкие и плотные агаризованные питательные среды: мясо-пептонный бульон (МПБ), бульон для выделения стрептококков, Энтерококкагар, среду Эндо, среду № 10, среду Чапека, среду Сабуро, Висмут-­сульфит агар, Цетримидный агар, среду Левина, среду Плоскирева (ФБУН ГНЦ ПМБ, Россия), 5 % агар c кровью барана (основа Колумбийский агар, Bio-­Rad, Франция); кровь барана дефибринированная (E&O Laboratories, пр-во Шотландия), желточно-­солевой агар (питательный агар для культивирования микроорганизмов ГРМ-агар, ФБУН ГНЦ ПМБ, Россия), хромогенный агар (UriSelect 4, Bio-­Rad, Франция) и агар Сабуро с 2% глюкозой и хлорамфениколом (SIFIN diagnostics, Германия). Идентификацию выделенных изолятов проводили путем пересева на среды Гисса с сахарами («пестрый ряд»), руководствуясь определителем бактерий Берджи и определителем патогенных и условно-­патогенных грибов, с использованием метода MALDI-TOF масс-спектрометрии (время пролетная матрично-­ассоциированная лазерная десорбционная ионизационная масс-спектрометрия) на приборе Vitek MS (BioMerieux, Франция) (60 проб). Чувствительность к антибиотикам определяли диско-­диффузионным методом по стандартной методике, описанной EUCAST, а также с использованием инструкций к тест-системам. Критерии для интерпретации категорий чувствительности по EUCAST: Clinical breakpoints — bacteria (v 13.0).

Исследование СМЖ также проводили в режиме реального времени методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) на приборе Rotor Gene‑3000 (Corbett Research, Австралия) с использованием комплекта реагентов тест-систем «ВЕТСКРИН. Стрептопол-­В», «ВЕТСКРИН. Стафипол», «ВЕТСКРИН. Колипол», «ВЕТСКРИН. Стрептопол» (IDS-LAB, Москва). Также использовали наборы реагентов для выявления ДНК E.faecalis/faecium и типирования VanA/VanB генов резистентности к гликопептидам, ДНК E. coli blaSTX–M и blaОХА‑10 генов резистентности к цефалоспоринам, ДНК Pseudomonas aeruginosa с определением генов устойчивости к карбопенемам (гены blaVIM и blaNDM); выявления и дифференциации ДНК Staphylococcus aureus и Staphylococcus spp. и MecA гена резистентности к бета-лактамам, ДНК Enterobacter spp. и blaGes генов резистентности к карбопенемам и blaDHA генов резистентности к защищенным пенициллинам и цефалоспоринам; выделения ДНК Klebsiella pneumoniae и генов blaKPC и blaOXA48‑like, отвечающих за резистентность к карбопенемам.

Статистическую обработку проводили с использованием пакетов анализа Microsoft Exсel 2007, Statistica 6.0.

Результаты исследования и обсуждение

При обследовании молочной железы коров, содержащихся в одной технологической группе, с целью диагностики мастита установили, что уровень воспалительных заболеваний вымени составил 36,6 %, при этом в большинстве случаев выявляли скрытую форму мастита (28,3 %), клиническую форму зарегистрировали у 8,3 % обследованных коров. На момент первого исследования количество пораженных долей молочной железы субклиническим и клиническим маститом составило соответственно 10,4 и 2,9 % от общего количества обследованных долей молочной железы коров.

При проведении повторного исследования (через 7 дней) количество животных со скрытым воспалением в молочной железе увеличилось на 3,4 % и составило 31,7 %, при этом также наблюдали увеличение уровня пораженных долей до 11,3 %. Количество коров с диагностированной клинической формой мастита сократилось до 5,0 % за счет применения данным животным терапии, в состав которой входили антимикробные препараты по установленной в сельскохозяйственной организации схеме (табл. 1).

Таблица 1
Заболеваемость коров маститом, n = 60

Период	Исследовано		Субклинический мастит				Клинический мастит
	коров	долей	коров	%	долей	%	коров	%	долей	%
Первое исследование	60	240	17	28,3	25	10,4	5	8,3	7	2,9
Второе исследование			19	31,7	27	11,3	3	5,0	4	1,7

Источник: выполнено М.Н. Исаковой.

Table 1
Incidence of mastitis in cows, n = 60

Period	Examined		Subclinical mastitis				Clinical mastitis
	cows	lobes	cows	%	lobes	%	cows	%	lobes	%
First examination	60	240	17	28.3	25	10.4	5	8.3	7	2.9
Second examination			19	31.7	27	11.3	3	5.0	4	1.7

Source: compiled by M.N. Isakova.

СК являются индикатором воспалительного процесса, их количественное определение в секрете вымени коров является одним из основных показателей, который широко используется сельскохозяйственными организациями для оценки здоровья вымени и качества молока. Проведенные нами исследования на технологической группе животных показали, что на момент первого исследования согласно ГОСТ Р 52054–2023 ^[2] у 63,3 % коров молоко по уровню СК соответствовало высшему сорту (до 250 тыс./мл). Количество СК в СМЖ с диапазоном от 251…400 тыс./мл (второй сорт) и от 401…750 тыс./мл (третий сорт), регистрировали у 11,7 и 16,7 % коров соответственно. Молоко от данных животных поступало в общий молокопровод. У 8,3 % коров, имеющих клиническое воспаление в молочной железе, установили повышение СК свыше 750 тыс./мл, доение производили в отдельную емкость с последующей утилизацией молока (табл. 2).

Таблица 2
Уровень соматических клеток в секрете молочной железы коров, n = 60

Показатель		Первое исследование		Второе исследование
		n	%	n	%
Соматические клетки, тыс./мл	до 250	38	63,3	35	58,3
	251…400	7	11,7	8	13,3
	401…750	10	16,7	11	18,3
	свыше 750	5	8,3	6	10,0

Источник: выполнено М.Н. Исаковой.

Table 2
Somatic cell count in cow mammary gland secretion, n = 60

Indicatorn		First examination		Second examination
		n	%	n	%
Somatic cells (thousand cells/ml)	to 250	38	63.3	35	58.3
	251…400	7	11.7	8	13.3
	401…750	10	16.7	11	18.3
	over 750	5	8.3	6	10.0

 Source: compiled by M.N. Isakova.

Известно, что лактоферрин в молоке повышается раньше, чем СК, так как является белком острой фазы воспаления, следовательно, количественные изменения лактоферрина в молоке могут свидетельствовать о более ранних патологических процессах, происходящих в молочной железе. Определение данного показателя в качестве диагностического критерия также начинает внедряться в практику животноводства, например в связи с доступностью на российском рынке разработанных в 2018 г. бельгийскими учеными наборов иммуноферментного анализа (Bovine Lactoferrin ELISA Kit) или создания программного обеспечения, включающего калибровки на лактоферрин для лабораторных приборов (Bentley DairySpec 250 Combi). Анализ полученных нами результатов первого исследования показал, что минимальное значение лактоферрина в СМЖ коров составило 0,25 мг/мл, а максимальное — 3,5 мг/мл, средний уровень лактоферрина в молоке коров составил 1,62 мг/мл. Во втором исследовании наблюдали увеличение минимального и максимального значения содержания лактоферрина в СМЖ коров до 0,69 и 4,1 мг/мл соответственно, средний уровень лактоферрина в молоке коров составил 2,48 мг/мл (табл. 3). При этом количество животных с отклонением от референтных значений в сторону увеличения показателя на момент исследования составило 48,3 %, через 7 дней — 51,7 %. Следовательно, у 3,4 % коров с момента первого исследования в молочной железе наблюдалось усугубление воспалительного процесса в вымени.

Таблица 3
Содержание соматических клеток, мочевины и лактоферрина в молоке коров, n = 60

Характеристики показателя	Первое исследование	Второе исследование
Соматические клетки, тыс./ мл
Мин. — макс.	165–1500	104–1500
Среднее арифм.	409	540
Лактоферрин, мг/мл
Мин. — макс.	0,25–3,5	0,69–4,1
Среднее арифм.	1,62	2,48
Мочевина, мг/100мл
Мин. — макс.	14,18–35,15	14,86–36,05
Среднее арифм.	18,15	25,74

Источник: выполнено М.Н. Исаковой.

Table 3
Somatic cell count, urea and lactoferrin in cow milk, n = 60

Performance indicator	First examination	Second examination
Somatic cells, thousand cells/ml
Min — max	165–1500	104–1500
Arithmetic mean	409	540
Lactoferrin, mg/ml
Min — max	0.25–3.5	0.69–4.1
Arithmetic mean	1.62	2.48
Urea, mg/100 ml
Min — max	14.18–35.15	14.86–36.05
Arithmetic mean	18.15	25.74

Source: compiled by M.N. Isakova.

Анализ результатов исследований уровня лактоферрина предполагает, что проведение усиленных профилактических мероприятий у животных с пограничными значениями уровня лактоферрина по данным первого исследования в дальнейшем могло бы позволить снизить количество животных с воспалительными процессами в молочной железе.

Среднее значение показателя мочевины в молоке коров в зависимости от периода исследования составило 18,15 и 25,74 мг/100мл. При этом минимальное и максимальное значение мочевины находилось на уровне 14,18 и 35,15 мг/100 мл соответственно на момент первого исследования, и 14,86 и 36,05 мг/100 мл — второго (см. табл. 3). На момент первого исследования максимальное отклонение от референтных значений показателя мочевины в СМЖ коров составило 35,15  ±  0,45 мг/100 мл, минимальное — 14,18  ±  0,18 мг/100 мл. При повторном исследовании значение максимального и минимального отклонения составило 36,05  ±  0,12 и 14,86  ± 0,21 мг/100 мл соответственно. Количество коров с отклонением от референтных значений в сторону уменьшения или увеличения показателя мочевины на момент исследования составило 38,3 %, через 7 дней — 46,7 % (табл. 4).

Таблица 4
Анализ показателей мочевины и лактоферрина в молоке коров, n = 60

Период	Референтное значение(интервал)	Отклонение от референтных значений M  ± m		Количество животных с отклонением от референтных значений
		Макс	Мин
				n	%
Мочевина, мг/100мл
Первое исследование	15,0…30,0	35,15 ± 0,45	14,18 ± 0,18	23	38,3
Второе исследование		36,05 ± 0,12	14,86 ± 0,21	28	46,7
Лактоферрин, мг/мл
Первое исследование	0,05…1,00	3,50 ± 0,24	–	29	48,3
Второе исследование		4,10 ± 0,18	–	31	51,7

Источник: выполнено М.Н. Исаковой.

Table 4
Analysis of urea and lactoferrin parameters in cows’ milk, n = 60

Period	Reference value (interval)	Deviation from reference values M ± m		Number of animals with deviation from reference values
		Max	Min	n	%
Urea, mg/100 ml
First examination	15.0–30.0	35.15 ± 0.45	14.18 ± 0.18	23	38.3
Second examination		36.05 ± 0.12	14.86 ± 0.21	28	46.7
Lactoferrin, mg/ml
First examination	0.05–1.00	3.50 ± 0.24	–	29	48.3
Second examination		4.10 ± 0.18	–	31	51.7

Source: compiled by M.N. Isakova.

Результаты, полученные с использованием культурального метода, показали наличие в пробах СМЖ коров бактерий группы кишечной палочки (38,9 %), золотистый стафилококк (38,9 %) и фекальный энтерококк (22,2 %). При ПЦР-исследовании в большинстве случаев выделяли Staphylococcus spp. (55,6 %), в одинаковом количестве в пробах секрета вымени коров обнаружили S. aureus и E. coli (22,2 %). Использование метода MALDI-TOF (масс-спектрометрия) позволило выделить более широкий спектр бактерий в изучаемых пробах: S. dysgalactiae (36,4 %), S. epidermidis (18,2 %), A. viridans (18,2 %), S. aureus (9,1 %), S. haemolyticus (9,1 %), C. pseudotuberculosis (9,1 %). При проведении повторного исследования установили изменение соотношения выделенных бактерий. Так при использовании культурального метода исследования из проб выделяли следующие изоляты: S. aureus (33,3 %), бактерии группы кишечной палочки (БГКП) (22,2 %), E. faecalis (14,8 %), Mucor (14,8 %), Streptococcus spp. (11,1 %), Aspergillus spp. (3,7 %). Метод ПЦР-исследования в равном количестве позволил выделить P. aeruginos и Staphylococcus spp. (46,2 %). При идентификации микроорганизмов методом MALDI-TOF в 45,5 и 27,3 % обнаруживали S. dysgalactiae и S. aureus соответственно, в минимальном количестве случаев были выделены C. pseudotuberculosis (9,1 %), S. epidermidis (9,1 %), A. viridans (9,1 %) (рис. 1).

Применение культурального метода и масс-спектрометрии позволило определить концентрацию выделенных изолятов микроорганизмов, способных сформировать полноценную микробную колонию. Так на момент первого исследования этиологически значимыми в развитии воспалительных реакций в молочной железе коров при использовании культурального метода установили БГКП, S. aureus E. faecalis в диагностическом титре более 10³ КОЕ/мл. При использовании масс-спектрометрии установили этиологическую значимость S. epidermidis при количестве микробных клеток 10⁴ КОЕ/мл. При повторном исследовании (культуральный метод) у изолятов S. aureus наблюдали увеличение количества колониеобразующих единиц в 1 мл исследуемой пробы (КОЕ/мл) до уровня 10⁷ (табл. 5).

Рис. 1. Выделенные изоляты микроорганизмов из проб секрета молочной железы коров при использовании разных методов исследования
Источник: выполнено М.Н. Исаковой.

Fig. 1. Isolated microorganisms from cow mammary gland secretion samples using different research methods
  Source: compiled by M.N. Isakova.

Таблица 5
Количество колониеобразующих единиц выделенных изолятов микроорганизмов при использовании разных методов исследования

Метод идентификации бактерий	Изолят	Значение КОЕ/мл	Первое исследование	Второе исследование
			Доля, %
Культуральный	БГКП	101	42,9	—
		102	14,3	50,0
		103	14,3	50,0
		104	14,3	—
		106	14,3	—
	S. aureus	102	62,5	33,3
		103	37,5	22,2
		104	—	11,1
		105	—	11,1
		107	—	22,2
	E. faecalis	102	25,0	—
		103	50,0	50,0
		104	25,0	50,0
Масс-спектрометрия	S. haemolyticus	103	9,1	—
	C. pseudotuberculosis	103	9,1	9,1
	S. dysgalactiae	103	36,4	45,5
		104	18,2	9,1
	S. epidermidis	103	9,1	27,3
	S. aureus	103	18,2	9,1
	viridans	102	9,1	—

Источник: выполнено М.Н. Исаковой.

Table 5
Number of colony-­forming units of isolated microorganisms using different research methods

Method of identification of bacteria	Isolate	CFU/ml	First examination	Second examination
			Lobe, %
Cultural	Coliform bacteria	101	42.9	—
		102	14.3	50.0
		103	14.3	50.0
		104	14.3	—
		106	14.3	—
	S. aureus	102	62.5	33.3
		103	37.5	22.2
		104	—	11.1
		105	—	11.1
		107	—	22.2
	E. faecalis	102	25.0	—
		103	50.0	50.0
		104	25.0	50.0
Mass spectrometry	S. haemolyticus	103	9.1	-
	C. pseudotuberculosis	103	9.1	9.1
	S. dysgalactiae	103	36.4	45.5
		104	18.2	9.1
	S. epidermidis	103	9.1	27.3
	S. aureus	103	18.2	9.1
	viridans	102	9.1	—

Source: compiled by M.N. Isakova.

При определении чувствительности к антибиотикам с помощью диско-­диффузионного метода зарегистрировали резистентность у единично выделенных изолятов C. pseudotuberculosis к бензилпенициллину, S. dysgalactiae — тетрациклину, S. aureus — бензилпенициллину, амоксициллину.

Метод ПЦР на момент первого исследования позволил выявить отсутствие у выделенных изолятов микроорганизмов генов резистентности к гликопептидам, цефалоспоринам, карбопенемам, бета-лактамам, защищенным пенициллинам. Повторным исследованием у 2,2 % выявленных изолятов P. aeruginosa обнаружены гены blaVIM и blaNDM, отвечающие за устойчивость к карбопенемам. При определении остаточных веществ в сборном молоке с помощью экспресс-­теста Delvotest BLF и SP-NT установили отсутствие антибиотиков β-лактамной группы (пенициллины, цефалоспорины) и тетрациклиновой группы.

Заключение

Исследования СМЖ коров играют важную роль в диагностике мастита. Для более раннего обнаружения воспалительного процесса в вымени коров возможно определение лактоферрина в молоке, так как его содержание повышается раньше, чем количество СК. Лактоферрин относится к белкам острой фазы воспаления и достаточно быстро реагирует на нарушения гомеостаза, что проявляется увеличением его уровня. Подсчет СК в СМЖ используется в практике как наиболее простой и доступный метод диагностики воспалительных заболеваний молочной железы коров. Определение отклонений в содержании мочевины в секрете вымени животных может служить дополнительным методом диагностики воспалительных заболеваний молочной железы за счет того, что при мастите в организме коров наблюдаются метаболические изменения, которые влияют на образование и выделение мочевины с молоком, например снижение усвояемости сырого протеина и нарушение баланса азота. Так же исследования мочевины в молоке позволят выявить животных с нарушениями обмена веществ на более ранних стадиях их возникновения. Применение исследований СМЖ коров разными методами, используемыми для выделения микроорганизмов, позволит получить более обширные данные о возбудителях, способных вызывать развитие мастита у коров. Культуральный метод наиболее эффективен для идентификации микроорганизмов, хорошо растущих на питательных средах, метод ПЦР применим для выделения трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм бактерий. Масс-спектрометрия обеспечивает высокую точность и разнообразие видовой идентификации микроорганизмов. Своевременное определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и определение генов резистентности позволит подобрать наиболее эффективные препараты для лечения. Контроль остаточных веществ в пробах сборного молока необходим для снижения экономических потерь, связанных с выбраковкой молока. Таким образом, комплексное применение разных методов исследования СМЖ коров позволит диагностировать мастит, оценив его стадию и течение, и как можно быстрее применить профилактические и эффективные лечебные мероприятия.

 

^{1 Семиволос А.М., Авдеенко В.С., Гавриш В.Г. Рекомендации по диагностике, терапии и профилактике маститов у коров. Саратов : Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова, 2009. 71 с. EDN: WCWMFV}

^{2 ГОСТ Р 52054–2023. Молоко коровье сырое. Технические условия. М., 2023.}

About the authors

Maria Nikolaevna Isakova

Ural Federal Agrarian Scientific Research Centre, Ural Branch of the Russian Academy
of Sciences

Author for correspondence.
Email: tmarya105@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-7130-5627
SPIN-code: 7824-9506

Candidate of Veterinary Sciences, Senior Researcher, Department of Reproductive Biology and Neonatology

112a Belinsky Street, Ekaterinburg, 620142, Russian Federation

Natalya Aleksandrovna Bezborodova

Ural Federal Agrarian Scientific Research Centre, Ural Branch of the Russian Academy
of Sciences

Email: n-bezborodova@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-2793-5001
SPIN-code: 7012-0999

Candidate of Veterinary Sciences, Senior Researcher, Department of Genomic Research and Animal Breeding

112a Belinsky Street, Ekaterinburg, 620142, Russian Federation

Yana Yuryevna Lysova

Ural Federal Agrarian Scientific Research Centre, Ural Branch of the Russian Academy
of Sciences

Email: mikroba.urnivi@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-6797-0659
SPIN-code: 5808-9197

Head of the Laboratory of Microbiological and Molecular Genetic Research Methods, Department of Veterinary Laboratory Diagnostics with a Testing Laboratory, Senior Researcher

112a Belinsky Street, Ekaterinburg, 620142, Russian Federation

Olga Yuryevna Oparina

Ural Federal Agrarian Scientific Research Centre, Ural Branch of the Russian Academy
of Sciences

Email: olia91oparina@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-6106-3003
SPIN-code: 6435-5512

Candidate of Veterinary Sciences, Senior Researcher, Laboratory of Immunology and Pathobiochemistry

112a Belinsky Street, Ekaterinburg, 620142, Russian Federation

References

Supplementary files