Динамика показателей спинномозговой жидкости в послеоперационный период при коррекции дегенеративного пояснично-крестцового стеноза у собак

Полный текст

Введение

Спинномозговая жидкость обладает высокой чувствительностью, но низкой специфичностью для выявления заболеваний, и возможные  ее аномалии относительно ограничены, учитывая разнообразие существующих неврологических патологий у животных. При этом анализ спинномозговой жидкости не всегда имеет отклонения при неврологических заболеваниях, но иногда он помогает поставить точный диагноз [1]. В последние годы многочисленные исследования оценивали связанные с заболеванием изменения в составе спинномозговой жидкости, исследования которой могут дать представление о механизмах, лежащих в основе заболеваний, и определить значимые диагностические, прогностические и терапевтические биомаркеры [2].

В этой связи влияние показателей крови в сравнительном аспекте операционной и спонтанной травм, контроль течения постоперационного периода при различных оперативных вмешательствах у собак является важным аспектом, позволяющим вносить коррекцию в сопровождение постоперационного периода [3—5]. По этим причинам точный анамнез, физикальное и неврологическое обследование, корреляция показателей крови, спиномозговой жидкости, визуализирующие исследования и другие диагностические тесты необходимы для точной и правильной интерпретации изменений ликвора и контроля патологического состояния в каждом отдельном случае [6].

В исследованиях P. Moissonnier, S. Blot и др. [7] сообщается, что анализ цереброспинальной жидкости считается важной составляющей во время спинальной хирургии. Лейкоцитоз в люмбальной цереброспинальной жидкости может возникать в послеоперационном периоде, но механизм влияния нейрохирургии как таковой на количество клеток спинномозговой жидкости в поясничном отделе неизвестен [8].

Цель исследования —  определить изменения в спинномозговой жидкости в течение послеоперационного периода при коррекции дегенеративного пояснично-крестцового стеноза у собак.

Материалы и методы исследования

В исследовании было 9 собак различных пород, в возрасте от 2 до 8 лет (опытная группа), которым выполняли оперативное вмешательство по исправлению дегенеративного пояснично-крестцового стеноза, в качестве контроля использовали показатели ликвора и периферической крови 3 здоровых беспородных собак, полученных в результате диспансеризации в возрасте до 5 лет.

Операции выполняли под общим обезболиванием. Хирургическое вмешательство осуществляли по методу B.P. Meij, N. Bergknut [9], заключающемуся в дорсальном доступе к дужкам позвонков L7-S 1, диссекции мягких тканей, рассечении дорсальной связки, формировании каналов в краниальных суставных отростках S 1, L7. В сформированные каналы билатерально устанавливали мультиаксиальные винты, которые соединяли с помощью балок. Затягивание гаек в винтах проводили в положении физиологической тракции L7-S 1. Рану ушивали послойно.

От каждого животного трижды отбирали на исследование по три ликворограммы на 1—3-и сутки после операции, на 12—15, 27—30-е сут после оперативного вмешательства.

Ликвор у собак отбирали из люмбальной цистерны с соблюдением мер асептики и антисептики в объеме до 1 мл на 5 кг веса со скоростью не более 1 мл/30 с, первые 1—5 капель не отбирали в пробирки для удаления «путевой» крови. Пробы ликвора отбирали в две стерильные пробирки эппендорф. В первую пробирку отбирали ликвор для органолептического и биохимического исследования. Во вторую пробирку отбирали ликвор со стабилизатором (1 капля 10 % формалина на 1—2 мл ликвора) для определения цитоза. Исследование ликвора выполняли в течение 30 мин после взятия.

Мазок ликвора на цитоз выполняли по методике C. Rusbridge [10]. Для приготовления мазка ликвора применяли чистое предметное стекло, фильтровальную бумагу размером с предметное стекло с круглым отверстием, стерильный «инсулиновый» шприц, острое стерильное лезвие, две канцелярские скрепки. Далее носик шприца обрезали. Затем на предметное стекло укладывали фильтровальную бумагу с отверстием посередине стекла. Далее шприц устанавливали на фильтровальную бумагу так, чтобы просвет шприца совпадал с отверстием в фильтровальной бумаге, и конструкция фиксировалась канцелярскими скрепками. Свежий ликвор из эппендорфа медленно (по капле) переливали в цилиндр, при этом фильтровальная бумага впитывала в себя воду, а клетки задерживались на стекле в пределах прорезанного «окошка». Исходный объем ликвора для этой процедуры лимитирован влагоемкостью фильтровальной бумаги. Далее разбирали конструкцию, аккуратно снимали и утилизировали фильтровальную бумагу, высушивали готовый препарат на воздухе и окрашивали.

Для окрашивания мазка ликвора, постановки реакций Панди и Нонне-Апельта применяли специализированный набор реагентов для клинического анализа спинномозговой жидкости «Диахим-Ликвор» по ТУ 9398-067-27428909-2012 (ООО «НПФ «АБРИС+», Россия). Принцип применения набора «Диахим-Ликвор»: реактив Самсона предотвращает цитоз клеток в смесителе в течение нескольких часов; уксусная кислота, которая содержится в реактиве, растворяет эритроциты, фуксин окрашивает ядра клеток в интенсивный красный цвет, что облегчает счет клеток и их дифференцирование; качественная реакция Панди: общий белок с раствором фенола дает помутнение, интенсивность которого зависит от содержания общего белка; качественная реакция Нонне —  Апельта: при взаимодействии глобулинов с насыщенным раствором сернокислого аммония появляется помутнение, интенсивность которого зависит от содержания глобулинов (осаждаются такие белковые фракции, которые остаются не осажденными в реакции Панди).

Подсчет клеток в мазках осуществляли в световом микроскопе Olympus-СХ31 (Япония) при увеличении 400× и в счетной камере Фукса —  Розенталя (Heinz Herenz, Германия).

Полученные результаты подвергали статистическому анализу с использованием критерия достоверности Стьюдента в программе Microsoft Excel.

Результаты исследования и обсуждение

Клиническое исследование органолептических характеристик ликвора собак после оперативной коррекции L7–S 1 пояснично-крестцового стеноза показало, что такие характеристики, как цвет, ксантохромия, прозрачность и фибринозная пленка, находились в пределах физиологической нормы. Ликвор был бесцветным и прозрачным, ксантохромия и фибринозная пленка не наблюдалась ни на 1—3-и, ни на 12—15-е, ни на 27—30-е сутки после операции.

Для получения ответов, позволяющих верифициоровать влияние операционной травмы на изменение биологических жидкостей собак с данной патологией, следует искать истоки изменений в патогенезе заболевания. В этой связи необходимо указать, что дегенерация пояснично-крестцовых дисков была обнаружена гистопатологически и при МРТ-исследованиях у немецких овчарок в возрасте одного года [11]. Это указывает на то, что в процесс дегенерации пояснично-крестцового диска могут быть вовлечены факторы помимо механической нагрузки. Снижение питания межпозвонкового диска вследствие изменений позвоночной кости и хрящевой замыкательной пластинки представляет собой альтернативное объяснение дегенерации. Метаболизм диска зависит от диффузии жидкости либо из костного мозга тел позвонков через субхондральную кость и хрящевые замыкательные пластинки, либо через фиброзное кольцо из окружающих кровеносных сосудов. Морфологические изменения в этих структурах могут препятствовать нормальному питанию диска и вызывать дальнейшую дегенерацию. Метаболизм клеток диска впоследствии нарушается, и целостность протеогликанов и концентрация воды снижают количество жизнеспособных клеток. Независимо от инициирующего механизма, механические и пищевые факторы могут суммироваться, и конечным результатом будет изменение функции диска для сопротивления приложенным силам [12].

Исследованиями установлено, что изменения химического состава ликвора после оперативной коррекции L7–S 1 пояснично-крестцового стеноза собак показали, что реакции Панди и Нонне —  Аппельта оставались отрицательными у животных опытной и контрольной групп. Клинический уровень общего белка на 1—3-й день после L7–S 1 оперативного вмешательства был выше контрольной группы на 0,04 г/л (P<0,001) с тенденцией к уменьшению на 12—15-е сутки после операции на 0,01 г/л (P<0,05) и возращением к исходным значениям к 27—30-м суткам после оперативного вмешательства. Углеводный обмен в ликворе собак после оперативной коррекции L7–S 1 пояснично-крестцового стеноза оставался на сопоставимом контрольной группе физиологическом уровне. Концентрации хлора и рН ликвора собак также были в пределах физиологической нормы при отсутствии осложнений в послеоперационный период (табл. 1).

Таблица 1 Результаты ликворограммы в течение послеоперационного периода (M±m, n=9)

Примечание. * P < 0,001 (в сравнении с контрольной группой).

Table 1. Liquorogram results during the postoperative period (M±m, n=9)

Note. * P < 0.001 (compared to the control group).

Следует отметить, что одновременное сдавление нескольких, а в конечном итоге и всех пояснично-крестцовых корешков спинномозговых нервов может привести к развитию сложной клинической картины, называемой синдромом конского хвоста. Клинические признаки, сопровождающие синдром конского хвоста, могут различаться у каждого отдельного пациента, но полностью развившийся синдром характеризуется болями в пояснице, двусторонним ишиасом, седловидной гипестезией или анестезией, двигательной слабостью нижних конечностей, поражением анального, бульбокавернозного, медио-подошвенного и ахиллова сухожилий, двусторонними рефлексами, дисфункцией сфинктеров прямой кишки и мочевого пузыря [13]. Клиническая картина напоминает таковую, наблюдаемую после повреждения мозгового конуса, однако за исключением того, что симптомы могут быть асимметричными [14].

Клинический клеточный состав ликвора собак в послеоперационный период коррекции L7–S 1 пояснично-крестцового стеноза находился в пределах физиологической нормы. Красных клеток крови в спинномозговой жидкости обнаружено не было. Количество ядросодержащих клеток у прооперированных собак было наибольшим в 1—3-е сутки после операции, что на 1,23 кл/ мкл больше по сравнению с контролем. На 12—15-е сутки после операции цитоз в опытной группе животных был больше контрольной на 1,17 кл/мкл. На 27—30-е сутки после операции цитоз у собак в опытной группе был ниже, чем в контроле на 0,43 кл/мкл.

В дополнение к механическим и алиментарным причинам дегенеративного пояснично-крестцового стеноза была предложена генетическая предрасположенность. Это особенно часто наблюдалось у породы немецких овчарок, где в нескольких исследованиях было указано, что наличие дегенеративного пояснично-крестцового стеноза превышает 20 % [15]. Генетическая предрасположенность наблюдалась в животной модели с использованием кроликов, у которых дегенеративное заболевание диска постоянно развивается в молодом возрасте. Таким образом, существует множество интерактивных факторов. Механические, травматические, пищевые и генетические факторы могут играть роль в этиологии дегенеративного пояснично-крестцового стеноза, возможно, в разной степени у разных собак и пород [16].

Повышение уровня лейкоцитов отмечали на 27—30-е сутки после операции на 38,16 % (Р < 0,001), а увеличение количества гранулоцитов на 23,17 % (Р < 0,001) в сравнении с контрольной группой. Количество лимфоцитов было понижено в течение всего постоперационного периода. Их значение было меньше, чем в контрольной группе, на 1—3-й день на 38,59 % а на 27—30-й день на 41,81 %. Остальные показатели клинического анализа крови у собак без осложнений преимущественно снижались по сравнению с контролем. На этом фоне тромбоциты превышали показатель контрольной группы в 1,6…1,7 раза (Р < 0,001), а моноциты —  в 1,2…1,3 раза (Р < 0,001) (табл. 2).

Таблица 2. Результаты лейкограммы в течение послеоперационного периода (M ± m)

Примечание. ^* — P  < 0,05; ^** — P  < 0,01; ^*** — P  < 0,001 (достоверность различий относительно контрольной группы).

Table 2. Leukogram results during the postoperative period (M ± m)

Note. * —  P < 0.05; ** —  P < 0.01; *** —  P < 0.001 (significant differences compared to the control group).

Заключение

Результаты собственных исследований показали, что соблюдение правил асептики и антисептики при проведении оперативного вмешательства, а также строгое следование методике операции, позволяет осуществлять ее без риска какого-либо влияния на спинномозговую жидкость. Динамика показателей ликвора и периферической крови находится в пределах физиологической нормы, и колебания показателей демонстрируют определенную зависимость от течения постоперационного периода. Таким образом, установлено, что оперативная коррекция L7–S 1 пояснично-крестцового стеноза у собак не влияет негативно на состав ликвора и способствует лишь физиологическому плейоцитозу в допустимых пределах.

Об авторах

Илья Федорович Вилковыский

Автор, ответственный за переписку.
Email: vilkovyskiy-if@rudn.ru
ORCID iD: 0000-0003-0084-6383

кандидат ветеринарных наук, доцент, доцент департамента ветеринарной медицины аграрно-технологического института

Список литературы