Морфологическая характеристика лейдигом у собак

Полный текст

Введение

Лейдигома относится к часто встречаемым новообразованиям у собак, а семенники являются одной из распространенных локализаций опухолей у самцов данного вида животных [1—9]. В семенниках собак чаще всего выявляются герминогенные опухоли, берущие свое начало из стволовых клеток (самая распространенное новообразование из этой группы —  семинома), и опухоли полового тяжа, состоящие из клеток Сертоли и клеток Лейдига (сертолиома и лейдигома) [2—5, 8, 10—12].

Данные новообразования имеют различный гистогенез, однако по результатам многих научных работ биологическое поведение семином и сертолиом схоже, метастатические поражения выявляются в до 15 % случаев, когда как у лейдигом описаны редкие единичные случаи выявления метастазов [4, 5, 7, 10, 12, 13—15].

Лейдигомы могут иметь различную морфологическую картину как в архитектонике опухолевой ткани, так и на уровне клеточной и ядерной морфологии [6, 7]. В некоторых случаях лейдигомы могут иметь схожие морфологические признаки с другими новообразованиями различного гистогенеза и локализации, что делает критически необходимым знание возможных вариантов морфологических картин новообразований семенников, в т. ч. и лейдигом [1, 6, 7]. На сегодняшний день дифференциальная диагностика, основанная на морфометрических показателях, достаточно затруднена, и в этой связи исследование проводилось с целью установления морфологических и морфометрических критериев, встречаемых в лейдигомах у собак, для совершенствования дифференциальной диагностики опухолей семенников.

Материалы и методы исследования

В ветеринарном онкологическом научном центре —  ветеринарной клинике «Биоконтроль» (г. Москва) за 2020 г. было гистологически исследовано всего 1876 случаев, из которых 1181 приходились на собак, в т. ч. 602 —  на самцов. Из 602 случаев только у 59 самцов собак имелись патологии семенников.

В исследования были включены все лейдигомы семенников от собак, которые проходили обследования (физикальный осмотр и ультразвуковое исследование) и лечение в ветеринарной клинике «Биоконтроль» в 2020 г. Изучены 46 семенников от 35 собак, у которых по результатам гистологического исследования были выявлены лейдигомы. У 11 животных имелись поражения двух семенников. Обследовались собаки возрастом от 5 до15 лет.

При проведении гистологического исследования семенники, удаленные в ходе хирургического вмешательства —  орхифуниколоэктомии, фиксировались 24 часа в 10% нейтрально-забуфернном формалине, после чего проходили стандартную гистологическую обработку (с использованием изопропилового спирта как дегидратанта и просветляющего агента), в результате которой были получены гистологические препараты толщиной 4 мкм, окрашенные гематоксилин-эозином согласно инструкции фирмы-производителя. Морфологически оценивались паттерны роста, отмечались характерные дополнительные признаки лейдигомы (выраженная васкуляризация), а также клеточная морфология, согласно критериям, опубликованным в различных ветеринарных патологических источниках [6, 7].

Ультрасонографическое исследование (УЗИ) проводилось на аппарате Philips Affiniti 70, микроконвексным датчиком С 8—5. Морфологическое и морфометрическое исследования опухолевых клеток проводили с помощью тринокулярного микроскопа Motic Panthera U с камерой Moticam Wi-Fi. При оценке размера ядер и цитоплазмы во всех лейдигомах случайным образом выбирались поля зрения при увеличении × 400 (объективы × 10/20) и у 100 опухолевых клеток в каждом случае определялся наибольший диаметр структуры с использованием программного обеспечения Motic Images Plus. Анизокариоз оценивался субъективно у 200 клеток и считался выраженным при наличии ядер, отличающихся друг от друга в размере в два и более раза, в случайно выбранных полях зрения при увеличении × 400.

Статистический анализ проводился с использованием программы BioStat (AnalystSoft Inc., California, United States).

Результаты исследования и обсуждение

По статистике к самым распространенным новообразованиям семенников у собак относятся опухоли полового тяжа, в частности, самой встречаемой опухолью является лейдигома [2—5, 8, 10]. Семинома и сертолима по различным источникам занимают второе и третье место [2—5, 8, 10]. Мы выполнили за 2020 г. орхиэктомию у 59 собак и исследовали 106 семенников. Из 106 случаев только в 46 были обнаружены лейдигомы по результату гистологического исследования. В остальных случаях выявлены другие новообразования семенников: семиномы и сертолиомы, а также некоторые неопухолевые патологии.

Только для 33 лейдигом была доступна информация о локализации в семеннике. В левом семеннике было выявлено 4 лейдигомы (18,18 %); в правом семеннике — 7 лейдигом (32,82 %); одновременно и в левом, и в правом — 11 лейдигом (50 %). В нашем исследовании лейдигомы у собак чаще выявлялись одномоментно в правом и левом семенниках. Однако по результатам других исследований не обнаружено зависимости частоты возникновения лейдигом у собак от расположения семенников в мошонке [2, 6]. В данном случае более вероятно, что полученный нами результат связан с неоднородностью выборки для исследования и преобладанием лейдигом как в правом, так и в левом семенниках у пациентов в данный период времени.

В ходе УЗИ 46 семенников с лейдигомами были определены размеры новообразований, которые составили от 3 до 33 мм (среднее —  11,53 ± 8,05 мм). При патологоанатомическом исследовании представленные лейдигомы имели размеры от 1 до 29 мм (среднее —  8,94  ±  6,93 мм). В результате однофакторного дисперсионного исследования (рис.) было выявлено, что представленные различия в размерах лейдигом у самцов собак, определяемых при УЗИ и патологоанатомическом исследовании, являются недостоверными  (p > 0,05). Следовательно, УЗИ позволяет в достаточной мере точно определить размер лейдигом при сравнении показателей с патологоанатомическим измерением данных новообразований.

График средних значений размеров, измеренных клинически и патологоанатомически: различия между двумя методами измерения являются недостоверными (p > 0,05)

Mean clinical and pathological measurements showing that the differences between  the two measurement methods are not significant (p > 0.05)

На момент проведения исследования во всех 46/46 случаях не были обнаружены признаки отдаленного метастазирования и рецидивного роста лейдигом.

При патологоанатомическом исследовании в 46/46 семенниках выявлены макроскопически новообразования. При проведении патологоанатомической вырезки 34/46 лейдигомы имели на разрезе цвет различных оттенков желтого (желтый, серо-желтый и светло-желтый), тогда как у 12/46 выявились оттенки коричневого или бежевого (светло-коричневый, светло-бежевый цвет). У 23/46 лейдигом выявлены участки геморрагий: от мелких единичных — м ногоочаговых — д о крупных очаговых и местно-распространенных. У 23/46 лейдигом выявлены кистозные полости: от мелких единичных или множественных до крупных. Выявляемые кистозные полости выстланы опухолевыми клетками Лейдига и иногда заполнены эозинофильным материалом. В 4 случаях в лейдигомах выявлены как геморрагии, так и кистозные полости.

Выявляемые геморрагии, более вероятно, связаны с обильным количеством сосудов, которые являются дополнительной характеристикой лейдигом [6, 7]. Предполагается нарушение целостности сосудов и/или нарушение опухолевого ангиогенеза, которые приводят к интратуморальным геморрагиям, однако требуется дополнительное исследование данного процесса для уточнения этиологии геморрагии в лейдигомах. Кистозные полости, выявляемые в лейдигомах, могут быть связаны с некрозами участков опухолей, так как образующиеся кисты имеют выстилку из прилегающих опухолевых клеток Лейдига с соответствующей архитектоникой тканей [6, 7].

При морфологическом исследовании на светооптическом уровне с использованием лабораторного микроскопа было выявлено, что у 46/46 лейдигом имелся сходный паттерн роста с формированием гнезд и трабекул опухолевых клеток, разделенных ветвящимися кровеносными капиллярами. Опухолевые клетки в 46/46 случаях имели полигональную эозинофильную зернистую цитоплазму, в 41/46 случаях выявлялась вакуолизация клеток с множественными оптически прозрачными вакуолями различного размера. В 2/46 случаях цитоплазма большинства опухолевых клеток была замещена одной крупной оптически прозрачной вакуолью, которая оттесняла ядро на периферию. В 3/46 лейдигом в цитоплазме опухолевых клеток визуализировался желтовато-коричневый пигмент. Цитоплазма имела размеры от 23,6 до 148,4 мкм (среднее — 6 6,21 ± 22,42 мкм). Разница между максимальным и минимальным размерами цитоплазмы составила 124,8 мкм. Ядерная морфология была схожа во всех 46 лейдигомах: форма ядер была округлая или овальная. Анизокариоз являлся выраженным в 37/46 лейдигом. Размер ядер варьировал при измерении от 9 до 57,6 мкм (среднее — 2 3,19 ± 7,10 мкм). Разница между средним максимальным и минимальным размерами ядер в лейдигомах составила 48,6 мкм. Ядерно-цитоплазматическое соотношение в среднем составило 2,9. В 9/46 лейдигомах визуализировались внутриядерные включения.

Во всех представленных в данном исследовании лейдигомах выявлялся схожий паттерн роста —  формирование гнезд и трабекул из опухолевых клеток, кроме того, во всех случаях были представлены ветвящиеся кровеносные капилляры, что соотносится с описанными в научных работах находками [6, 7, 9]. По данным морфологическим находкам можно констатировать, что опухолевые клетки лейдигом чаще имеют схожую морфологию с нормальными клетками Лейдига, однако, в небольшом количестве случаев возможно появление «адипоцитоподобных» клеток, имеющих оптически прозрачную вакуоль, оттесняющую ядро на периферию [6]. В последнем случае возможна неверная интерпретация морфологических находок и постановка неверного диагноза —  липомы.

Исходя из полученных морфометрических данных, можно сделать вывод, что размеры цитоплазмы и ядер могут значительно варьировать (табл.). В ряде случаев возможно выявление выраженного анизокариоза, однако, по имеющимся литературным данным, несмотря на возможную атипию, лейдигомы исключительно редко метастазируют, но требуется дальнейшее исследование ассоциации клеточной атипии с прогнозом [6, 10, 12, 13]. Требуется выяснение точной природы внутриядерных включений, обнаруженных в описанном исследовании [6].

Результаты статистической обработки морфометрических данных, полученные в ходе исследования лейдигом у самцов собак

Параметры	Возраст	Размер патологоанатомический	Размер клинический	Ядра	Цитоплазма
Среднее	10,39	8,94	11,53	23,2	66,21
Стандартное отклонение	2,45	6,93	8,05	7,11	22,42
Медиана	10,0	7,0	10,0	21,7	62,6
Минимум	5,0	1,0	3,0	9,0	23,6
Максимум	5,0	29,0	33,0	57,6	148,4

Results of statistical processing of morphometric data obtained during the study  of testicular interstitial cell tumors in male dogs

Parameters	Age	Pathologoanatomic size	Clinical size	Nuclei	Cytoplasm
Mean	10.39	8.94	11.53	23.2	66.21
Standard deviation	2.45	6.93	8.05	7.11	22.42
Median	10.0	7.0	10.0	21.7	62.6
Minimum	5.0	1.0	3.0	9.0	23.6
Maximum	5.0	29.0	33.0	57.6	148.4

Заключение

В ходе исследования описаны морфологические и морфометрические критерии, характерные для лейдигом у собак и позволяющие улучшить морфологическую диагностику данного новообразования. Показано, что измерение размера лейдигом у собак с помощью ультрасонографического и макроскопического методов имеют незначительные различия (p > 0,05), что позволяет использовать оба метода в рутинной практике.

Была описана нетипичная и относительно редкая морфология лейдигомы с «адипоцитоподобными» клетками, которую необходимо принимать во внимание из-за схожести морфологического строения с доброкачественными опухолями жировой ткани — л ипомами. Морфометрический анализ показал значительную вариацию в размере цитоплазмы (от 23,6 до 148,4 мкм; среднее — 6 6,21 ± 22,42 мкм) и ядер (от 9 до 57,6 мкм; среднее —  23,19 ± 7,10 мкм) среди опухолевых клеток лейдигом. Несмотря на выраженные анизоцитоз и анизокариоз, в 59/59 случаях не были выявлены признаки отдаленного метастазирования и местного рецидивирования, что не позволяет судить об атипии клеток лейдигом как о признаке озлокачествления.

Об авторах

Алексей Алексеевич Газин

Российский университет дружбы народов; Ветеринарный онкологический научный центр - ветеринарная клиника «Биоконтроль»

Автор, ответственный за переписку.
Email: svgazin@ya.ru
ORCID iD: 0000-0001-7168-8744

аспирант департамента ветеринарной медицины аграрно-технологического института, Российский университет дружбы народов; ветеринарный врач - гистолог отделения патоморфологической диагностики, ветеринарный онкологический научный центр - ветеринарная клиника «Биоконтроль»

Российская Федерация, 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6; Российская Федерация, 115522, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24, стр. 10

Юрий Анатольевич Ватников

Российский университет дружбы народов

Email: vatnikov_yua@rudn.university
ORCID iD: 0000-0003-0036-3402

доктор ветеринарных наук, профессор, директор департамента ветеринарной медицины аграрно-технологического института

Российская Федерация, 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6

Екатерина Витальевна Абрамова

Ветеринарный онкологический научный центр - ветеринарная клиника «Биоконтроль»

Email: dementeva98kate@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-8989-5071

ветеринарный врач - цитолог отделения патоморфологической диагностики

Российская Федерация, 115522, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24, стр. 10

Список литературы

Дополнительные файлы